ПН-ПТ: 8:00 —20:00

СБ: 9:00 —16:00

ВС: выходной.

Справочная:

(495) 481-8800(многоканальный)

(499) 242-0735

Главная Статьи для специалистов Сравнение лабораторных анализов при использовании различных методик исследования мочи.

Сравнение лабораторных анализов при использовании различных методик исследования мочи.

Документ без названия
 

Кулешова С.В. заведующая КДЛ, врач высшей категории
 Москалева С.П.врач высшей категории
 Зорина Л.В. врач высшей категории
 Григорьева Е.В. врач высшей категории
 Минушкина Л.О. д.м.н., профессор кафедры терапии, кардиологии и функциональной диагностики Учебно-научного медицинского центра УДП РФ

Резюме

При переходе на новые методики  сотрудникам лаборатории следует внимательно изучать инструкции и тестировать новинки перед составлением стандартных операционных процедур. В статье рассматриваются проблемы, с которыми может столкнуться любая лаборатория при модернизации. Успешный опыт внедрение пластиковых слайд-планшетов для исследования мочи и сложности, возникшие в процессе внедрения предложены для обсуждения.
Summary the introduction of new techniques requires careful study guide and test innovations prior to the preparation of standard operating procedures. The article discusses the problems that can face any laboratory at modernization. The successful introduction of the plastic slide plates urine and difficulties encountered in the implementation process proposed for discussion.
«С микроскопическим исследованием мочи каждый врач должен быть знаком самым обстоятельным образом, так как в некоторых случаях только путём такого исследования и возможна точная и решительная диагностика данного страдания.»    В.Е. Предтеченский

 

Клинический пример.

Пациент К. 34 лет обратился к терапевту для получения санаторно-курортной карты. На приеме активно жалоб не предъявляет. При осмотре общее состояние удовлетворительное. Температура тела 36.6°С. Сознание ясное. Кожные покровы обычной окраски. Видимые слизистые розовые. Лимфоузлы не увеличены. Отеков нет. Системы органов дыхания, система органов пищеварения без патологии. Тоны сердца звучные, ритм правильный. ЧСС 68 в мин. Артериальное давление 120/80 мм. рт. ст. Симптом поколачивания - отрицательный. Мочеиспускание безболезненное. Даны направления на анализы в необходимом объеме. По результатам выполненных анализов патология не выявлена. Пациенту выдается медицинская справка формы №072/у. После санаторно-курортного лечения в выписном эпикризе пациенту были даны рекомендации обратиться к нефрологу в связи с изменениями в анализе мочи по методу Нечипоренко. В анализе отмечалось увеличение количества эритроцитов до 2400 клеток в мл. и лейкоцитов до 4800 клеток в мл.
Пациент К. был вызван для обследования, в ходе которого проводилось исследование мочи, крови, консультация уролога, нефролога и терапевта. Результаты анализов были в пределах референтных значений. Консультации специалистов патологии не выявили. Было решено связаться с лечащим врачом пациента К. для уточнения результатов анализов. В ходе детального и подробного опроса выяснилось, что объяснить отклонения в результате анализа мочи выполненного по методу Нечипоренко специалистам санатория тоже не удалось. Клинически данных за почечную патологию у пациента К. в течение всего срока пребывания в санатории не было. Однако, после расспросов о методах и способах исследования выяснилось, что подсчет форменных элементов в моче велся врачами не с использованием камеры Горяева, а в пластиковом планшете. Данный случай привлек наше внимание, и мы стали интересоваться случаями несоответствий клинической картины у пациентов с данными анализа мочи по методу Нечипоренко. Анализируя в течение полугода результаты пациентов, полученные в нашей лаборатории с данными этих же пациентов, полученными в других лечебных учреждениях, мы выяснили, что в ряде случаев имеются  завышенные результаты анализа при использовании слайд-планшетов при отсутствии клинических проявлений болезни, функциональных изменений и  при нормальных значениях анализов в нашей лаборатории.

История приборов для подсчёта клеточных элементов насчитывает уже более 150 лет. Сетки в счетных камерах, предложенных  различными авторами неодинаковы как по рисунку, так и по площади.

В начале прошлого века для подсчёта клеток крови применялся аппарат Тома-Цейсса (рис.1), который в дальнейшем был заменён на камеру Предтеченского (рис.2) и , наконец в середине прошлого века прибор обрёл современный вид – сетку камеры Горяева, состоящую из 225 больших квадратов, 25 из которых разграфлены на 16 маленьких.  Она и используется сегодня как основной инструмент подсчёта клеток в 1 мл.мочи по методу Нечипоренко

Рисунок 1. Сетка аппарата  Thoma-Zeiss

Рисунок 2. Сетка Предтеченского

Принцип сеток в камерах  один и тот же. Они разделены на то или иное число квадратов, различным образом сгруппированных. Зная объём квадрата можно произвести расчёт и  определить  количество клеток в единице объёма.

Перед вводом в работу пластиковых  слайд - планшетов мы решили провести исследование,  целью которого было оценить воспроизводимость результатов подсчёта с помощью  камеры Горяева и нового  пластикового слайд-планшета.

Материал и методы исследования

В качестве материала для исследования были взяты образцы крови 16 больных. Проводился подсчёт  количества лейкоцитов. В качестве контрольного измерения использовались данные автоматического гематологического анализатора Сисмекс KX-21N. Подсчёт также велся 3 независимыми врачами, которые определяли  количество лейкоцитов с помощью камеры Горяева и слайд-планшета.  
Камера Горяева предназначена для подсчёта форменных элементов крови и клеточных элементов спинномозговой жидкости. ТУ9443-007-29508133-2007  ,РУ МЗ № ФСР 2008/02731 от 11.06.2008 г. Технические данные камеры : площадь - 9 мм2, глубина - 0,1 мм, объём - 0,9 мм3.
Камера (слайд-планшет) для микроскопического исследования осадка мочи и других биологических жидкостей, Aptaca. Каждая ячейка снабжена сеткой для подсчёта (3х3 мм) и покрыта тонкой прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного стекла. Каждая сетка поделена на 5 квадратов (1х1 мм), которые в свою очередь разделены на 9 маленьких квадратов (0,333х0,333 мм). Изготовлена камера  из полиметилметакрилата (ПММА). Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2011/09223 от 19 марта 2012 г. Подсчёт вёлся согласно инструкции, опубликованной на сайте производителя [5].

Для исследования мы брали образцы венозной крови, определяя количество лейкоцитов с помощью автоматического гематологического анализатора Сисмекс KX-21N ( Sysmex KX-21N ) Производитель: Roche Diagnostics (Швейцария).

Результаты исследования

Проанализировано 16 проб. Подсчет вёлся независимо 3 врачами с высшей категорией. Средние значения количества лейкоцитов по данным анализатора составили 5950±2407*109/л(M±SD), при подсчёте с помощью камеры Горяева  (средние данные у 3 независимых врачей) 4916±1794,4*109/л , с помощью слайд планшета (средние данные у 3 независимых врачей)  - 9477±3624*109/л. Данные подсчёта и с использованием камеры Горяева и с использованием слайд - планшета достоверно отличались  от данных автоматического анализатора Sysmex  KX-21 N. Для двух врачей  из трёх результаты подсчёта с помощью камеры Горяева и автоматического анализатора достоверно не отличались, но существенно отличались от значений, полученных при работе со слайд-планшетом

Рисунок3.  Дисперсия результатов подсчёта форменных элементов крови с помощью камеры Горяева и слайд-планшета.

Обращает на себя внимание, что при подсчёте с помощью слайд -планшета были выше не только собственно средние значения количества форменных элементов крови, но и дисперсия полученных результатов, оказавшаяся достоверно большей, чем дисперсия результатов  автоматического анализатора. Наименьшая дисперсия значений количества форменных элементов наблюдалась при использовании камеры Горяева (Рис 3).

Обсуждение результатов

Проведенное нами исследование показало существенные расхождения в подсчёте количества форменных элементов крови с помощью различного лабораторного оборудования.  Ранее мы, проводя подсчёт в камере клеточных элементов для анализа мочи по Нечипоренко с помощью слайд-планшета, получали результаты, которые не укладывались в  референсные значения. В литературе найти описание нашей проблемы или ее решение нам не удалось.
Следует также отметить, что имелись существенные разночтения, между официальной инструкцией на русском языке,  и инструкцией, полученной нами непосредственно от производителя.
Мы в работе ориентировались на инструкцию, предоставленную производителем оборудования. Для собственного исследования мы выбрали подсчёт форменных элементов крови, а не мочи, в связи с тем, что имели автоматизированный способ контроля их количества.
Следует отметить, что подсчёт клеточных элементов в камере Горяева оказался более точным. У двух врачей из трёх результаты измерений достоверно не отличались от данных автоматического анализатора. Полученные данные при использовании слайд-планшета у всех трёх врачей существенно отличались, как от данных анализатора, так и от данных,  традиционного подсчёта с помощью камеры Горяева. Работа с камерой Горяева позволяет получить меньший разброс результатов, чем работа со слайд - планшетом.
Таким образом, при переходе к иному методу подсчёта (например, при замене камеры Горяева на  слайд-планшет для выполнения анализа по методу Нечипоренко)  использование существующих референтных значений вряд ли допустимо.
При работе с другим материалом, заменяя камеру Горяева на слайд -планшет, необходимо предварительно проверить возможность использования существующих норм. Результаты, полученные при работе со  слайд-планшетами часто оказываются выше, чем при использовании других методов. 
На бланке с результатом следует указывать прибор, использованный в работе – камера Горяева или пластиковый слайд-планшет. Это важно для корректного сравнения результатов.
Также необходимо учесть, что инструкция, прилагаемая к слайд-планшетам не приводит полный объём информации для безопасного использования. В случае подсчёта клеток по методу Нечипоренко нельзя пользоваться предложенной формулой в инструкции без применения коэффициента концентрации. Данные по коэффициенту приводятся в полной версии инструкции производителя, либо высчитываются самостоятельно.

На наш взгляд эта тема представляет практический интерес, т.к .камеры для подсчёта клеток широко применяются и по сей день. Своей скромной публикацией мы открываем площадку для обсуждения. Просим откликнуться, и присоединиться к обсуждению специалистов разных направлений, в работе которых есть опыт внедрения слайд-планшетов.

Использованная литература:
1. «Руководство к клинической микроскопии.» В.Е.Предтеченский. Москва 1901 г.  Типо-литография Т-ва И.Н.Кушнерев и Ко.  256 с 101ил

«Rukovodstvo k klinicheskoi mikroskopii.» V.E.Predtechenskii. Moskva 1901 g. Tipo-litography T-va I.N.Kushnerev I Ko 256 p 101 pic